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本方案適用于果粒橙、果凍、火腿、酸奶、棒棒糖、黑巧克力和調(diào)制乳粉等樣品中胭脂蟲紅的測定。

本方法的定量限為：當稱樣量為2g時，液體及半固體試樣（含乳半固體除外）中胭脂蟲紅（以胭脂紅酸計）定量限為0.02g/kg，固體及含乳半固體試樣（調(diào)制乳粉除外）中胭脂蟲紅（以胭脂紅酸計）定量限為0.04g/kg，調(diào)制乳粉中胭脂蟲紅（以胭脂紅酸計）定量限為0.1g/kg。

(1) 標準儲備液(1.0mg/mL)(Cat.#:48204)：準確稱取10.0mg標準品，用水溶解，并定容至10mL容量瓶中，搖勻。

(2) 標準系列工作液：分別準確吸取標準儲備液(1.0mg/mL):0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，用0.1%磷酸水溶液定容至刻度，搖勻，配制成質量濃度分別為5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L和100mg/L標準系列工作液。

3.1 液體及半固體試樣(含乳半固體除外)

稱取2g試樣于50mL離心管中，加入40mL鹽酸溶液(2.0mol/L)，搖勻，置于沸水浴中加熱30min，取出冷卻至室溫后，振蕩5min，超聲5min，5000rpm離心5min，上清液轉移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，經(jīng)適量脫脂棉過濾，待凈化。

3.2 固體及含乳半固體試樣(調(diào)制乳粉除外)

稱取2g試樣于50mL離心管中，加入40mL鹽酸溶液(2.0mol/L)，搖勻，置于沸水浴中加熱30min，取出冷卻至室溫后，振蕩5min，超聲5min，5000rpm離心5min，上清液轉移至100mL容量瓶中，殘渣加入40mL鹽酸溶液(2.0mol/L)，常溫條件下，重復提取一次，合并兩次提取液，用水定容至刻度，經(jīng)適量脫脂棉過濾，待凈化。

3.3 調(diào)制乳粉

稱取2g試樣于50mL離心管中，加入40mL鹽酸溶液(2.0mol/L)，搖勻，置于沸水浴中加熱30min，取出冷卻至室溫后，振蕩5min，超聲5min，5000rpm離心5min，上清液轉移至250mL容量瓶中，殘渣加入40mL鹽酸溶液(2.0mol/L)，常溫條件下，重復提取兩次，合并三次提取液，用水定容至刻度，經(jīng)適量脫脂棉過濾，待凈化。

ProElut^® PXA 150mg/6mL（Cat.#:68304）

(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，棄去流出液；

(2)上樣：將25mL待凈化液加入柱中，棄去流出液；

(3)淋洗：依次加入12mL水、6mL甲醇，棄去流出液，真空抽至柱體近干；

(4)洗脫：加入6mL 2%磷酸甲醇溶液，收集洗脫液；

(5)重新溶解：將洗脫液在40℃水浴下氮氣吹至近干，用0.1%磷酸水溶液定容至2mL，渦旋混勻，8000rpm離心5min，取清液上機分析。

色譜柱：Diamonsil^® Plus C18 150x4.6mm,5μm（Cat.#:99401）

流  速：1.2mL/min    

進樣量：10μL

柱  溫：40℃

檢測器：PDA 494nm

流動相：A:0.1%磷酸水溶液 B:0.1%磷酸乙腈溶液

梯度設置:

食品中胭脂蟲紅的HPLC檢測的添加回收結果。